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大家來了解下,細(xì)胞凍存的注意事項!

更新時間:2022-07-19    點(diǎn)擊次數(shù):4558

  大家來了解下,細(xì)胞凍存的注意事項!

 

  細(xì)胞凍存是利用細(xì)胞凍存管,將細(xì)胞放在低溫環(huán)境,減少細(xì)胞代謝,以便長期儲存的一種技術(shù)。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,起到了細(xì)胞保種的作用。不妨來看看BUNSEN本生小編的詳解:

  細(xì)胞凍存與復(fù)蘇:

  一般來說,細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)移,最佳的策略是進(jìn)行低溫保存,而細(xì)胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時,細(xì)胞內(nèi)的酶活性均已停止,即代謝處于*停止?fàn)顟B(tài),故而可以長期保存

  1、從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存,但為對數(shù)生長期細(xì)胞。在凍存前天盡量換培養(yǎng)液;

  2、將凍存管放入液氮容器或從中取出時,要做好防護(hù)工作,以免凍傷;

  3、凍存和復(fù)蘇盡量用新配制的培養(yǎng)液。

  細(xì)胞凍存:

  目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由冰晶形成的細(xì)胞損傷。

  1、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌種保存很少用于細(xì)胞凍存。

  2、取對數(shù)生長期的細(xì)胞,用胰蛋白酶把單層生長的細(xì)胞消化下來,懸浮生長的細(xì)胞則直接將細(xì)胞移至15ml離心管中。

  3、離心1000 rpm,5 min.

  4、去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,計數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的最終密度為5x10^6/ml~1x10^7/ml.

  5、 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,凍存時間及操作者。

  6、 凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)到-25℃以下時,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時,則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。

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